采集的造血干细胞如何保存?
造血干细胞可以长期冰冻保存于液态氮中,为减少冰冻保存的容量,用淋巴细胞分离液分出单个核细胞(MNC),经TC 199或RPMR 1640培养液,洗涤2次后,用10%的人AB血清的TC 199或RPMR 1640将细胞浓度调整为4×107/ml,置于冰水中冷却,再用10%的AB血清的TC199或RPMR 1640培养液配置浓度为20%的二甲基亚砜(DMSO)防冻液,置于冰水中冷却。然后向MNC中加入等量上述DMSO防冻液,使DMSO最终浓度为10%,MNC的最终浓度为2×107/ml,含有DMSO的细胞在10分钟内冷冻,为保证细胞质量,必须严格控制降温速度,从4℃到-30℃,每分钟降1~2℃,-30℃至-80℃每分钟降5℃,至-80℃降冰冻袋直接放入液氮。骨髓细胞保存可采用程控降温-196℃液氮保存及-80℃长期保存,两种保存方法均有良好的回收率,尤其是-80℃保存比较适合基层医疗单位。骨髓细胞在4℃可保存48小时,其粒单核祖细胞的回收率在80%左右,72小时后回收率只有37%。故这种保存方法只适用于短时间预处理处理的患者。